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快速分離水中腸球菌的方法

更新時(shí)間:2018-09-12  |  點(diǎn)擊率:1594

腸球菌屬(Enterococcus),為革蘭陽性,成雙或短鏈狀排列的卵圓形球菌,無芽胞,無莢膜,部分腸球菌有稀疏鞭毛。腸球菌初列為D群鏈球菌,1984年,腸球菌被重新分類為腸球菌屬,在經(jīng)過DNA-DNA和DNA-RNA雜交的研究后證明它與鏈球菌屬有較遠(yuǎn)的關(guān)系。

 

腸球菌是人類和動(dòng)物腸道正常菌群的一部分,通常在引起腹腔和盆腔感染所分離的混合菌絲中發(fā)現(xiàn),既往認(rèn)為腸球菌是對(duì)人類無害的共棲菌,但近年研究已證實(shí)了腸球菌的致病力。在需氧革蘭陽性球菌中,它是僅次于葡萄球菌的重要院內(nèi)感染致病菌,腸球菌亦可引起院外感染。腸球菌不僅可引起尿路感染、皮膚軟組織感染,還可引起危及生命的腹腔感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎和腦膜炎等。

 

腸球菌通常從食品、植物、水和土壤中分離,可能由于它的來源是糞便使得他們的天性在惡劣環(huán)境中比較耐受。在牛奶和奶酪制品中通常會(huì)找到糞腸球菌、屎腸球菌和少量的堅(jiān)忍腸球菌,偶然也會(huì)發(fā)現(xiàn)小腸腸球菌和鉛黃腸球菌。不同于其他乳酸菌,腸球菌不能被認(rèn)為是“一般認(rèn)為安全”(GRAS),并且它在水中檢測(cè)是作為糞便污染物的指標(biāo)的。一般認(rèn)為對(duì)于腸球菌的安全評(píng)價(jià)程序是一個(gè)模棱兩可的狀況。一方面,腸球菌在作為奶酪技術(shù)中作為發(fā)酵培養(yǎng)物被認(rèn)為是由積極作用的;另一方面,它們被認(rèn)為是新興的人類病原體。

 

由于腸球菌的表型多樣性,這使得腸球菌種的生理測(cè)試鑒定一直存在問題。此外,物種鑒定的常規(guī)實(shí)驗(yàn)往往需要很長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間。使用16S和23S rDNA基因的基因型鑒定方法更加的準(zhǔn)確,但是它們還不能區(qū)分所有腸球菌的物種(例如鶉雞腸球菌和鉛黃腸球菌有99.8%的16S rDNA的同源性)。

 

國標(biāo)中分離和鑒定腸球菌應(yīng)用傾注法,根據(jù)樣液在選擇性腸球菌瓊脂(36 ℃±2 ℃培養(yǎng)18 h~24 h)或KF瓊脂(36 ℃±2 ℃ 培養(yǎng)24 h~ 48h)上生長(zhǎng)的典型菌落數(shù),在腸球菌瓊脂平板上形成帶棕色環(huán)的棕黑色菌落;在KF平板上形成暗紅色至粉紅色菌落,邊緣整齊, 用無菌接種針從每個(gè)腸球菌瓊脂平板或KF平板挑取5個(gè)典型菌落,進(jìn)一步做確證實(shí)驗(yàn)。

 

HiMedia公司(微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)商)生產(chǎn)的快速腸球菌顯色培養(yǎng)基(貨號(hào):M1414),該培養(yǎng)基中的蛋白胨為菌種提供氮源,添加的氯化鈉使腸球菌的快速生長(zhǎng)保持滲透平衡,dietanhuana能抑制伴隨的微生物菌落,尤其是革蘭氏陰性菌,存在于腸球菌中的酶β-D-葡糖苷酶裂解顯色底物,使菌落呈藍(lán)綠色。HiMedia的快速腸球菌顯色培養(yǎng)基用于快速鑒定和區(qū)分水樣中的腸球菌,18-24h后出結(jié)果,方便快捷。我國在新修訂的生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB5749-2006中資料性附件中增加了腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭狀芽胞桿菌,修訂后限值腸球菌/(CFU/100mL) 和產(chǎn)氣莢膜梭狀芽胞桿/(CFU/100mL)限值均為0,快速腸球菌顯色培養(yǎng)基的研發(fā),為快速檢測(cè)水中腸桿菌起到重要意義。

 

快速腸球菌顯色培養(yǎng)基(貨號(hào):M1414)在上得到了廣泛的應(yīng)用,如Chellandi Mohandass等人,在研究喀徹灣沿岸的沿海地區(qū),潮汐周期中水質(zhì)指標(biāo)的分散性和可收回性文章中就有應(yīng)用(Chellandi Mohandass, S. Jaya KumarN, Ramaiah.Dispersion and retrievability of water quality indicators during tidal cycles in coastal Salaya, Gulf of Kachchh.Environmental Monitoring and Assessment[J], 2010, 169(10): 639–645);Krishna M. Raja等人,推定致病性標(biāo)記香港海鷗形菌的ESBL基因和脂多糖的分子生物學(xué)研究中也有應(yīng)用(Krishna M. Raja ,Asit Ranjan Ghosh.Molecular Insight of Putative Pathogenicity Markers with ESBL Genes and Lipopolysaccharide in Laribacter hongkongensis.Applied Biochemistry and Biotechnology[J], 2014, 174(5) : 1935–1944.)

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