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檢測水中大腸埃希氏菌O157:H7的HiMedia顯色培養(yǎng)基

更新時間:2019-10-21  |  點擊率:1283

現(xiàn)在,市面上能見到的顯色培養(yǎng)基大多用于食品和臨床,但HiMedia廠家生產(chǎn)的顯色培養(yǎng)基覆蓋面廣,能用于供水行業(yè)和環(huán)境監(jiān)測站。下面為您介紹一下。

 

顯色培養(yǎng)基的評價常有多個指標,如靈敏度,特異性等,它們也與所檢測的樣本類型有關。生產(chǎn)廠家經(jīng)常不提供這些指標。但一些第三方檢測中心或研究機構對此則有相關研究,并發(fā)表在專業(yè)期刊上。

 

2011年,《學術研究期刊》發(fā)表了一篇對顯色培養(yǎng)基的比較研究。作者來自埃及國家研究中心水污染研究部,他們通過用顯色培養(yǎng)基檢測了水中的大腸埃希氏菌O157:H7,對顯色培養(yǎng)基進行了評價(見參考文獻1)。

 

作者指出,在水中,E. coli O157:H7可以極低水平存在,伴隨大量競爭菌群。傳統(tǒng)方法需要超過48小時完成培養(yǎng),同時還需進一步的生化鑒定和血清學鑒定。依據(jù)原理主要是SMAC平板,在麥康凱瓊脂基礎上用山梨醇替代乳糖,E. coli O157:H7不能發(fā)酵山梨醇。該方法存在一定的偏差,因為有些E. coli O157:H7菌株可以發(fā)酵山梨醇。

 

顯色培養(yǎng)基的出現(xiàn)可改善這一檢測方法。研究者采用HiMedia公司生產(chǎn)的HiCrome EC O157:H7 Selective agar。因為存在特異性顯色底物,E. coli O157:H7菌落呈現(xiàn)深紫色,E. coli菌落則呈現(xiàn)淡粉色至淡紫色。

 

研究者收集了尼羅河地表水的60個水樣本。收集水平遵照了200年APHA發(fā)布的指南。所有水樣均收集在無菌的1L玻璃瓶中(Simax品牌,捷克共和國產(chǎn)),并在4℃條件下運輸?shù)綄嶒炇摇K袠悠吩谑占?小時內進行細菌學檢查。

 

研究用的E. coli O157:H7標準菌株編號為ATCC 43895。研究者除采用了HiMedia出的HiCrome EC O157:H7 Selective agar(簡稱HEC)外,還采用了美國Biolog 產(chǎn)的Rainbow agar O157(簡稱RB)。該平板為無色,在上面E. coli菌落呈現(xiàn)紅紫藍黑等不同顏色,E. coli O157:H7呈現(xiàn)深灰色至深黑色。而其他葡萄糖醛酸酶陽性菌株呈現(xiàn)紅色或洋紅色菌落。該培養(yǎng)基添加有新生霉素和亞碲酸鹽。

 

研究遵循了2005年APHA指南,采用薄膜過濾法對E. coli O157:H7進行了檢測和計數(shù)。濾膜放置在培養(yǎng)基上,37℃倒置孵育24小時。對典型菌落計數(shù),單位為CFU/100 ml。菌落的進一步確證采用PCR法。終計算得出靈敏度(真陽性率)、特異性(真陰性率)、總有效率(即(真陽性+真陰性)×100/總數(shù)),并進行統(tǒng)計學分析(t檢驗)。

 

結果見表1、表2、表3和表4。

 

表1. 在不同培養(yǎng)基上,E. coli O157:H7標準菌株的菌落特征

菌株

培養(yǎng)基

陽性菌落

正確數(shù) (%)

假陰性菌落

假陰性數(shù)(%)

E. coli O157:H7

HEC

深紫/紫紅

30 (93.8)

淡粉/淡紫

2(6.2)

RB

灰/黑

30 (93.8)

不同顏色(如紅紫藍)

2(6.2)

 

表2. 非E. coli O157:H7菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落情況

菌株

培養(yǎng)基

真陰性結果 (%)

假陽性結果(%)

E. coli O157:H7

HEC

10 (100)

0(0.0)

RB

9 (90.0)

1(10.0)

 

表3. 培養(yǎng)基分離標準菌株的有效性

 

HEC

RB

PCR

真陽

30

30

30

真陰

10

9

9

假陽

0

1

1

假陰

2

2

1

靈敏度

93.7%

93.7%

96.7%

特異度

100%

90%

90%

有效率

95.2%

92.8%

95.1%

 

表4. 60個尼羅河水樣在不同培養(yǎng)基上E. coli O157:H7的假陽性率

 

分離株數(shù)量

假陽性數(shù)(%)

HEC

80

5(6.25)

RB

80

8(10.0)

 

可見,HiCrome EC O157:H7 Selective agar分離E. coli O157:H7具有更高的靈敏度和特異度,并已被PCR進一步確證。顯色培養(yǎng)基不失為一種靈敏、快速、特異的方法,并且無須任何確證試驗。

 

HiMedia公司是微生物產(chǎn)品生產(chǎn)商,具有40多年生產(chǎn)研發(fā)經(jīng)驗,具有WHO-GMP認證、ISO9001,ISO13485質量體系認證和CE、FDA注冊登記。產(chǎn)品已行銷世界上140多個國家。

 

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商,在微生物培養(yǎng)和檢測領域,一如既往地為您帶來的服務。

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