今天我們書接上回，接著講講另外3個關(guān)鍵點。

公共設(shè)備可能存在問題

儀器的參數(shù)

也會影響細胞狀態(tài)

如果細胞不存在污染，培養(yǎng)體系沒有瑕疵、細胞初始狀態(tài)也沒有問題，那么可以考慮公共儀器設(shè)備是否存在紕漏。

常見有水浴鍋溫度、室內(nèi)溫度及濕度、培養(yǎng)箱參數(shù)、水浴鍋溫度等。

水浴鍋是細胞培養(yǎng)室常用的儀器，要定期用溫度計對其工作溫度進行檢查，觀察是否存在溫度不準(zhǔn)、溫度驟變的情況。另外要強調(diào)一點，水浴鍋也是常見的污染源之一，水浴鍋中的水最好使用無菌水，并定期做好清潔工作，推薦大家使用MB WaterShield，可以有效清除、預(yù)防水槽中的支原體，方便安全、省時省力省心。

 

細胞實驗室的溫度及濕度：儀器還是操作對溫度沒有特殊要求，維持舒適的溫度即可，比如18~26℃；過高的濕度會導(dǎo)致微生物的滋生，所以建議正常維持濕度在70%以下。應(yīng)定期用溫度濕度測試儀對細胞實驗室進行檢測，以防溫控系統(tǒng)出現(xiàn)故障。

培養(yǎng)箱參數(shù)：一般哺乳類與禽類細胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37～38℃；大多數(shù)細胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳氣體比例為宜。但在實際操作過程中，細胞培養(yǎng)箱有可能會出現(xiàn)以下故障，影響細胞培養(yǎng)體系，進而使細胞生長變得緩慢：

• 溫度和溫度設(shè)定不準(zhǔn)；

• 細胞培養(yǎng)箱濕度不能維持；

• 細胞培養(yǎng)箱的二氧化碳濃度不準(zhǔn)。

對應(yīng)解決方法給大家整理好，建議大家保存，以備不時之需。

實驗人員可能發(fā)生變化

細胞“飼養(yǎng)員”的更換

也可能影響細胞生長速率

作為一名合格的細胞“飼養(yǎng)員”，一定要預(yù)先了解所養(yǎng)細胞的“習(xí)性”：用哪種培養(yǎng)法、使用何種類型培養(yǎng)體系（血清種類、基礎(chǔ)培養(yǎng)基類型、是否添加生長因子以及抗生素等），盡可能還原初始的培養(yǎng)環(huán)境，讓細胞有個適應(yīng)的過程。另外，實驗者自身也要注意操作規(guī)范，按照標(biāo)準(zhǔn)流程培養(yǎng)。

實驗試劑可能發(fā)生改變

培養(yǎng)用的試劑

也可能會是影響因素

不同品牌的試劑可能會有些許差別，對于一些比較嬌貴的的細胞，這些細微的差別很可能會導(dǎo)致細胞生長受到影響。因此我們一直強調(diào)大家“追本溯源”，盡可能用與原來一致的培養(yǎng)條件。

如果要更換試劑，建議大家先做個對照試驗，看看新的試劑對細胞生長有沒有影響。

另外，除了以上這六點，還有一點需要特別注意，就是：

細胞的代次

一般來說，細胞傳代次數(shù)是一定的（一些癌細胞系屬于特例），特別是像間充質(zhì)干細胞這類對代次比較敏感的細胞，需要格外注意，傳代次數(shù)過高后（10-15代左右），細胞生長速率也會明顯減慢。在實驗時，盡量選擇代次較低且狀態(tài)穩(wěn)定的細胞。